Aflatoxina M1 ELISA

Imunoensaio enzimático para determinação quantitativa de Aflatoxina M1 em leite e produtos lácteos.

Introdução: As aflatoxinas pertencem à classe das micotoxinas. Quimicamente são definidas como difuranociclopentanocumarinas ou difuranopentanolidocumarinas, ou seja, as aflatoxinas contêm um anel diidrofurano ou tetraidrofurano, ao qual é condensado um sistema cumarínico substituído. Das cerca de 20 aflatoxinas conhecidas, os fungos Aspergillus flavus e A. parasiticus produzem exclusivamente aflatoxinas B1, B2, G1 e G2, e todas as outras aflatoxinas são derivadas dessas quatro. Os derivados são desenvolvidos por metabolismo em humanos, animais e microrganismos ou por reações ambientais.
Aflatoxina M1 foi o primeiro metabólito da aflatoxina B1, que pôde ser inequivocamente detetado por Allcroft e Carnaghan no leite de vacas em 1963. Por esta razão este primeiro derivado foi chamado de aflatoxina M1 (= leite). Como outras investigações mostraram, outros mamíferos também excretam a aflatoxina M1 no leite, fezes e urina. As contaminações do leite e produtos lácteos podem ser perigosas para os seres humanos, pois M1 é semelhante à aflatoxina B1 quanto à sua hepatotoxicidade. M1 é apenas menos cancerígeno.
Para proteger as pessoas contra doenças induzidas por aflatoxinas, é necessário o controlo qualitativo e quantitativo dos alimentos ameaçados de extinção, além de precauções higiénicas adequadas, que evitem a formação de aflatoxinas. Aflatoxina M1 ELISA é um método rápido, económico e sensível para detetar aflatoxina M1 em leite e produtos lácteos. Após uma preparação adequada da amostra, 40 amostras podem ser testadas em duplicado em 140 minutos.

Descrição: O teste quantitativo de aflatoxina M1 é baseado no princípio do ensaio imunoenzimático. Um conjugado de aflatoxina é ligado à superfície de uma placa de microtitulação. As amostras ou padrões contendo aflatoxina M1 e um anticorpo dirigido contra a aflatoxina M1 são administrados nos poços da placa de microtitulação. A aflatoxina M1 imobilizada e livre compete pelos sítios de ligação do anticorpo. Após uma hora de incubação à temperatura ambiente, os poços são lavados com solução de lavagem diluída para remover o material não ligado. Um conjugado de peroxidase contra o anticorpo é administrado nos poços e após outra hora de incubação, a placa é lavada novamente. Em seguida, uma solução de substrato é adicionada e incubada por 20 minutos, resultando no desenvolvimento de uma cor azul. O desenvolvimento da cor é inibido pela adição de uma solução stop e a cor fica amarela. A cor amarela é medida fotometricamente a 450 nm. A concentração de aflatoxina M1 é indiretamente proporcional à intensidade da cor da amostra de teste.

Características do produto:
- O kit contém reagentes para 96 determinações;
- Placa de microtitulação composta por 12 tiras com 8 poços quebráveis;
- Padrões de aflatoxina M1: 0, 100, 500, 1000, 5000, 10000 pg/mL;
- Leitor de ELISA a 450 nm;
- Faixa padrão: 10– 1000 pg/mL;
- Sensibilidade analítica: <10 pg/mL.