O que é a Legionella?
A doença do legionário, causada pela bactéria Legionella pneumophila, é uma doença grave. Em Portugal, esta bactéria foi detetada pela primeira vez em 1979 e está listada como doença de notificação obrigatória.
Legionella pneumophila é uma bactéria Gram-negativa que está dispersa no meio ambiente e normalmente reside em reservatórios de água como rios, lagos, nascentes, fontes termais e solo húmido. Em condições ambientais favoráveis, esta bactéria pode-se multiplicar rapidamente, levando a níveis anormais na circulação e nos sistemas de abastecimento de água. Os principais fatores que contribuem para o seu crescimento incluem a presença de calor (crescimento ideal entre 32ºC-40ºC dentro de uma faixa de 20-50ºC), água estagnada e disponibilidade de nutrientes/resíduos.
Esta bactéria pode ser dispersa no ar, como por meio de névoa ou aerossol destas fontes de água. Uma vez no ar, representa um risco para a saúde humana como um patógeno facultativo intracelular que pode utilizar as células eucarióticas dos macrófagos alveolares para sua multiplicação. No ambiente, frequentemente associa-se a protozoários como a Amiba, utilizando as suas células eucarióticas para sua multiplicação. Esta associação não só facilita a replicação da bactéria como também proporciona um ambiente protetor, principalmente contra desinfetantes.
Legionella pneumophila, a espécie mais significativa clinicamente, engloba 15 serogrupos. Entre eles, os serogrupos 1, 4 e 6 são responsáveis por 80-90% das infeções humanas. A Legionella pneumophila do serogrupo 1 é comummente encontrada na maioria dos pacientes diagnosticados com doença do legionário. (1)
Doença dos legionários
Em 1976, um congresso nos EUA resultou na morte inesperada de 34 pessoas e pneumonia grave em 221 indivíduos. Esse evento aumentou o interesse pela Legionella, pois a infeção ocorreu devido às condições favoráveis ao crescimento bacteriano no sistema de ventilação da sala de congressos.
Em Portugal, a Legionella foi descoberta em 1979 e está incluída na lista de declaração obrigatória de doenças transmissíveis. Em 2004, um novo programa de vigilância epidemiológica da doença do legionário foi estabelecido para fortalecer os esforços de monitoramento.
A Doença do Legionário é a forma mais frequente e grave da doença, caracterizada pela pneumonia como sintoma principal. A Legionella pneumophila é o principal agente causador, correspondendo a 90% dos casos. Os pacientes comummente apresentam febre alta, anorexia, mialgia generalizada, tosse seca, dor torácica, diarreia e vómito durante os estádios iniciais da doença. (1)
Onde podemos encontrar Legionella
Os habitats naturais da Legionella são reservatórios de água, como rios, lagos, nascentes, fontes termais e solo húmido. Também podem ser encontrados em sistemas artificiais de circulação de água como circuitos de água quente sanitária (chuveiros), circuitos de água fria para consumo humano, irrigação por aspersão, filtros de equipamentos de ar condicionado e suas condutas, sistemas de refrigeração, desumidificadores, nebulizadores e fontes decorativas. (1)
Fontes de transmissão
A exposição à Legionella pode não levar à infeção. A infeção depende do nível de contaminação da água, da eficiência de disseminação da bactéria pelo ar, das características do hospedeiro humano e da virulência da estirpe de Legionella. A maioria dos casos de infeção (80%) são esporádicos sem reservatório conhecido e os restantes 20% enquadram-se no contexto de surtos.
A infeção é transmitida por via aérea, através da inalação de gotas de água contaminada e não é transmitida pelo consumo de água contaminada ou de pessoa para pessoa.
A capacidade da Legionella ter acesso ao trato respiratório está inicialmente relacionada ao tamanho do aerossol inalado. Aerossóis com diâmetro maior que 10 µm ficam retidos no nariz e na garganta; aerossóis entre 5-10 µm podem atingir o trato respiratório superior e inferior; aerossóis ainda menores entre 2-5 µm podem atingir os pulmões e as vias aéreas. O período de incubação pode variar entre os 2 e os 14 dias (frequentemente 3-6 dias). (1)
Grupos de risco
Nem todo o indivíduo exposto à bactéria desenvolve a doença. Esta doença é rara em crianças ou adolescentes com menos de 20 anos de idade. O sistema imunológico sozinho pode ser suficiente para combater bactérias e evitar infeções. A doença afeta principalmente indivíduos do sexo masculino, tabagistas, alcoolistas, imunodepressivos e com doenças crónicas e pessoas acima de 30-40 anos ou quando as defesas do sistema imunológico estão baixas, e suscetíveis à infeção após contacto com o microrganismo.
Pacientes em tratamento com quimioterapia ou corticoides, portadores de doenças respiratórias crónicas, como asma ou DPOC (Doença Pulmonar Obstrutiva Crónica) e idosos correm grande risco ao entrarem em contacto com bactérias, podendo levar a casos graves de pneumonia, que podem levar à morte.
A infeção por Legionella em hospitais pode ocorrer devido a vários fatores de risco: cirurgia recente, intubação, ventilação mecânica, aspiração, presença de ondas nasogástricas e uso de equipamentos para fisioterapia respiratória. (1)
Como proceder com a infeção por Legionella
Se houver sintomas e exposição ao aerossol de qualidade duvidosa, especialmente se houver casos conhecidos na mesma área. As autoridades de saúde devem ser informadas para relatar esses casos antes de entrar em contacto com um médico ou hospitais locais.
Diagnóstico
Várias amostras podem ser retiradas de várias secreções do trato respiratório, incluindo escarro. Frequentemente o escarro apresenta características purulentas, muitas vezes com consistência aquosa ou contendo sangue.
O crescimento bacteriano pode ser realizado usando meios com suplementos nutritivos adequados (meios BCYE) e períodos de incubação mais longos (5-10 dias). O exame de cultura tem a vantagem de permitir a comparação de isolados clínicos com isolados ambientais.
qPCR é um bom método para o diagnóstico de Legionella. Permite a deteção rápida, possibilitando intervenção e tratamentos oportunos e fornece alta sensibilidade e especificidade, garantindo resultados confiáveis e precisos para a gestão eficaz de infeções por Legionella.
Para análise sorológica, um aumento de 4 vezes na concentração de anticorpos anti-Legionella, em soro colecionado com mais de 2 semanas de intervalo pode ser utilizado para diagnóstico retrospetivo de Legionella.
A imunofluorescência direta pode ser realizada diretamente em amostras biológicas de forma rápida com 95% de especificidade, mas apenas 25-75% de sensibilidade. (1)
Tratamento
O tratamento da doença do legionário envolve a administração de antibióticos. O tratamento com antibióticos é necessário para pacientes com sintomas pulmonares, enquanto os pacientes não pulmonares normalmente não requerem antibióticos. O início imediato da terapia com base nos resultados do exame é essencial.
Os antibióticos recomendados para a doença do legionário são macrólidos (azitromicina ou claritromicina), quinolonas (levofloxacina ou moxifloxacina), tetraciclinas (doxiciclina) ou rifampicina. O levofloxacino, considerado antibiótico de primeira linha, tem demonstrado melhor atividade em relação aos macrólidos. Em pacientes gravemente enfermos, a rifampicina pode não ser necessária ao usar doxiciclina ou fluoroquinolonas.
A duração do tratamento (5 dias a 3 semanas) pode variar dependendo do estado do paciente e do antibiótico escolhido. (1)
Detecção de Legionella em fontes de água
Os métodos de teste para avaliação de risco podem variar dependendo do sistema de água e do motivo do teste.
Métodos de cultura tradicionais (espalhamento de inóculo):
O teste de cultura é o método tradicional para detetar a bactéria Legionella em fontes de água. Envolve permitir que uma amostra de bactéria cresça em um ambiente controlado até que se torne visível para análise. No entanto, confiar apenas no teste de cultura tem desvantagens. O processo é demorado, levando até duas semanas, o que atrasa a confirmação da presença de Legionella durante os surtos da doença. Equipamentos e pessoal especializado são necessários para cultura precisa, e o crescimento de Legionella dentro de biofilmes complica ainda mais o processo, dificultando a deteção precisa em placas de Petri.
Características do método da placa de cultura:
- Crescimento de bactérias viáveis de todas as espécies de Legionella.
- Os resultados são normalmente apresentados em cfu/mL com um limite de deteção de aproximadamente 10 ufc/mL
- Produzir isolados para posterior caracterização.
- Resultados relatados entre 7-14 dias
- Depende da experiência, know-how e rigor do laboratório.
- Preferido para avaliação de tendências de crescimento.
Reação em Cadeia da Polimerase Quantitativa (qPCR):
Avanços recentes em biotecnologia introduziram um método mais rápido e preciso para detetar a bactéria Legionella, chamado teste qPCR. Ao contrário do teste de cultura, que envolve o cultivo de bactérias, o teste qPCR isola o DNA da bactéria de uma amostra de água. Isso permite a deteção de Legionella sem a necessidade de cultura, fornecendo resultados em menos de duas horas. O teste qPCR também pode identificar bactérias viáveis, mas não cultiváveis, oferecendo uma avaliação mais abrangente do risco. Bactérias dormentes que podem não crescer em uma placa de Petri ainda podem ser detetadas por meio do teste qPCR, pois seu DNA permanece presente.
Características do qPCR:
- Deteta DNA específico de Legionella;
- Pode não diferenciar entre bactérias vivas ou mortas.
- Resultados geralmente relatados em unidades genómicas (GU), que não são equivalentes diretos a ufc
- Resultados relatados muito rapidamente – entre 2-48 horas
- Pode ser útil para “screening” negativo.
- Preferido para avaliar se a remediação foi bem-sucedida.
Como prevenir a propagação da Legionella
Como a Legionella é capaz de sobreviver por longos períodos em condições ambientais hostis, o ser humano corre um risco maior de ser exposto a esse agente. Por se tratar de uma bactéria de difícil prevenção, é importante uma verificação periódica dos sistemas de água e de refrigeração dos edifícios, sendo estes os focos de infeção.
Vários procedimentos para a eliminação da Legionella:
- Operações físicas – Controlar a temperatura da água (mantendo temperaturas abaixo de 20ºC ou acima de 60ºC), promovendo a produção de vapor e utilizando a desinfeção ultravioleta.
- Químico – Usando cloro e seus derivados, outros agentes como bromo (Br), ionização de cobre (Cu2+) e prata (Ag+).
- O emprego de produtos biocidas, agentes anticorrosivos e desincrustantes é essencial para mitigar o risco de contaminação por Legionella.
- Promover a deteção periódica da bactéria Legionella.
Em ambientes domésticos, podemos tomar algumas medidas preventivas para reduzir o risco de contaminação por Legionella:
- Evitar a inalação de vapores de água de duches, piscinas, jacuzzis, ou outros locais cuja higiene possa parecer duvidosa ou desconhecida ou se pertencer a um grupo de risco.
- Periodicamente, ajustar o termoacumulador para aquecer acima de 60ºC por um determinado período de tempo para matar qualquer bactéria que possa estar a crescer.
- Limpar os filtros das torneiras e mergulhar as “cabeças” dos chuveiros em água sanitária, com o cuidado de enxaguá-los muito bem após a limpeza.
- Evite inalar os vapores iniciais emitidos por fontes de água estagnada, como aquecedores de água ou aquecedores a gás. (2)
Detecção de Legionella com kits de PCR em tempo real
- Os kits BPMR aproveitam ao máximo a PCR em tempo real para permitir um método rápido e confiável para Legionella spp. e deteção da bactéria Legionella pnemophila.
- Esses kits são baseados na amplificação e deteção de genes usando PCR em tempo real com um ensaio baseado em DNA.
- Os reagentes de PCR prontos para uso contêm tudo o que é necessário para detetar organismos-alvo com alta sensibilidade e especificidade.
- O KIT DE TESTE DE DETEÇÃO DE PCR EM TEMPO REAL Legionella spp. permite a deteção do alvo, a Legionella spp.
- O KIT DE TESTE DE DETECÇÃO POR PCR EM TEMPO REAL Legionella pneomophila permite a deteção de um alvo, a bactéria Legionella pneomophila.
- Todos os kits incluem ainda um controlo interno (IC) que permite a exclusão de resultados falsos negativos.
- Os nossos kits incorporaram uma polimerase Hot Start para permitir uma amplificação de PCR confiável. A mistura oferece síntese de DNA altamente reprodutível.
Vários testes foram realizados para garantir a qualidade do kit, como inclusão, sensibilidade e exclusividade:
- Inclusividade: Um total de 30 estirpes de Legionella spp foram testadas. Todas as estirpes alvo testadas com os kits foram detectadas correspondendo a 100% de inclusão.
- Sensibilidade: A amplificação do alvo foi observada em amostras contaminadas com pelo menos 103-104 cfu/1 L para Legionella spp e Legionella pneumophila.
- Exclusividade: Um total de 30 microrganismos não-alvo foram testados com os kits que apresentaram 100% de exclusividade sem resultados positivos.
- Para extração de DNA, nosso kit BIOPREMIER Tampão de Extração de DNA rápido permite extração e purificação eficientes de DNA de amostras. Além disso, os produtos de DNA purificados podem ser usados diretamente na PCR.
A BPMR apresenta uma solução global a partir da extração e purificação do DNA de Legionella spp. e Legionella pneumophila desde amostras de água até sua deteção usando nossos kits qPCR
Vantagens importantes!
- Resultados rápidos (um-dois dias) em poucos passos: primeiro Purificação do DNA Bacteriano, seguida de Deteção de Patógenos e por último Análise de Dados. Confira abaixo o “Protocolo Simples de Três Passos”.
- Acessível e fácil de usar graças a kits prontos para uso.
- Protocolos harmonizados para deteção de PCR em tempo real.
- Compatível com os equipamentos de PCR em tempo real mais utilizados.
- Inclui controles positivos e negativos de PCR e controle interno.
Solução de PCR em tempo real: um protocolo simples de três etapas
Este protocolo flexível e robusto se encaixa perfeitamente em qualquer fluxo de trabalho de laboratório analítico para alcançar a melhor produtividade! Varia de testes de baixo a alto rendimento, com interface de usuário simples de usar, para, no final, fornecer uma interpretação de amostra eficiente.
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KIT DE TESTE DETEÇÃO PCR EM TEMPO REAL Água Legionella Spp.: clique aqui
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Referências:
