BCA Quantification Kit (Broad Range)

O BCA Quantification Kit (Broad Range) da GRiSP é formulado para a quantificação da concentração total de proteínas numa faixa de 20-2000µg/ml. É adequado para utilização com espectrofotómetros standard, bem como com leitores de microplacas.

INFORMAÇÕES GERAIS:O ensaio de proteínas com Ácido Bicinchonínico (BCA) para a quantificação de proteínas é um ensaio colorimétrico altamente sensível, compatível com soluções de proteínas solubilizadas em detergentes. Semelhante ao método de Lowry, o princípio baseia-se na reação de Biureto, na qual se formam complexos Cu2+-proteína em condições alcalinas. Como as proteínas atuam como agentes redutores, o Cu2+ é reduzido a Cu+, que é posteriormente quelado por duas moléculas de BCA, formando um complexo roxo que apresenta forte absorção a 562 nm. Como a quantidade de Cu+ é proporcional à quantidade de proteína, a medição da absorvância pode ser utilizada para quantificar a concentração de proteína através da comparação com a absorvância de soluções de proteína de concentração conhecida. Em comparação com o método de Lowry, o método BCA é não só mais simples e rápido, como também apresenta menor interferência de detergentes não iónicos e sais. É insensível à presença de detergentes como SDS (1%) e Triton X-100.
O BCA Quantification Kit (Broad Range) da GRiSP é formulado para a quantificação da concentração total de proteínas numa faixa de 20-2000µg/ml. É adequado para utilização com espectrofotómetros standard, bem como com leitores de microplacas. Todo o procedimento pode ser realizado em menos de uma hora.

CARACTERÍSTICAS DO KIT:
O BCA Quantification Kit (Broad Range) da GRiSP é compatível com os seguintes detergentes até às concentrações indicadas: 5% Brij®-35, 1% Brij®-56, 1% Brij®-58, 5% CHAPS, 5% CHAPSO, 5% Ácido desoxicólico, 5% Nonidet P-40 (NP-40), 5% Octil ß-glucósido, 5% Octil ß-tioglucopiranosídeo, 5% SDS, 1% Span® 20, 5% Triton® X-100, 1% Triton® X-114, 1% Triton® X-305, 1% Triton® X-405, 5% Tween®-20, 5% Tween®-60, 5% Tween®-80 e 1% Zwittergent® 3-14.

Também não sofre interferência dos seguintes agentes redutores e compostos contendo grupos tiol até às concentrações indicadas: 10% N-acetilglucosamina (em PBS), 1mM DTE, 1mM DTT, 10mM Glicose, 0,01 ß-mercaptoetanol, 3M Tiocianato de potássio e 0,01% Timerosal. Além disso, a presença de agentes quelantes como EDTA até 10mM e Citrato de sódio (até 200mM) não tem efeito negativo no resultado do ensaio.

De um modo geral, reagentes quelantes ou compostos que alterem o pH ou reduzam o cobre são conhecidos por interferir com o ensaio. Estes incluem ácido ascórbico, catecolaminas, creatinina, cisteína, EGTA, glicerol (impuro), peróxido de hidrogénio, hidrazidas, ferro, lípidos, melibiose, vermelho de fenol, sacarose (impura), triptofano, tirosina e ácido úrico.