Imunoensaio enzimático para determinação quantitativa de Penicilina em leite e camarões.
Introdução: A penicilina foi detetada acidentalmente por Alexander Fleming em 1929. A droga pertence às micotoxinas e é gerada pelo fungo Penicillium chrysogenum. A penicilina como antibiótico é utilizada preferencialmente no tratamento de bactérias gram-positivas, tanto para humanos quanto para animais. De todas as drogas administradas ilegalmente, os antibióticos são os mais usados na pecuária produtiva. As contaminações em alimentos ou leite são ingeridas por humanos e podem levar a infeções graves por germes patogénicos que se tornaram resistentes à penicilina ou a alergias. As reações alérgicas aparecem com gravidade diferente, dependendo da dose e disposição individual, e apresentando sintomas de urticária a choque anafilático. Durante o teste de rotina de amostras de leite para antibióticos, em mais de 90% dos casos positivos, são detetadas preparações de beta-lactâmicos ou penicilinas. O método de escolha para a determinação da contaminação por penicilina em alimentos sempre foi o ensaio microbiológico. Esses procedimentos não permitem, no entanto, nenhuma determinação quantitativa e nenhuma identificação do antibiótico, o que é obtido por um kit de teste ELISA sensível ou colunas de imunoafinidade juntamente com HPLC.
Descrição: O teste quantitativo de penicilina baseia-se no princípio do ensaio de imunoabsorção ligado a enzima. Um conjugado de penicilina é ligado à superfície de uma placa de microtitulação. Amostras ou padrões contendo penicilina e um anticorpo dirigido contra a penicilina são administrados nos poços da placa de microtitulação. A penicilina imobilizada e livre competem pelos sítios de ligação do anticorpo. Após uma hora de incubação à temperatura ambiente, os poços são lavados com solução de lavagem diluída para remover o material não ligado. Um conjugado de peroxidase dirigido contra o anticorpo penicilina é administrado nos poços e após outra hora de incubação, a placa é lavada novamente. Em seguida, uma solução de substrato é adicionada e incubada por 20 minutos, resultando no desenvolvimento de uma cor azul. O desenvolvimento da cor é inibido pela adição de uma solução stop e a cor fica amarela. A cor amarela é medida fotometricamente a 450 nm. A concentração de penicilina é indiretamente proporcional à intensidade da cor da amostra de teste.
Características do produto:
- O kit contém reagentes para 96 determinações;
- Placa de microtitulação composta por 12 tiras com 8 poços quebráveis;
- Padrões de penicilina: 0, 4, 10, 40, 100, 400 ng/mL;
- Leitor de ELISA a 450 nm;
- Faixa padrão: 4 - 400 ng/mL;
- Sensibilidade analítica: 3 ng/mL